激發(fā)波長和發(fā)射波長是熒光檢測器檢測熒光的必要參數(shù)
2018-04-18
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熒光檢測器的特性，使光源的能量分布、單色器的透射率和檢測器的響應(yīng)等性能會隨波長而變，所以同一化合物在不同的儀器上會得到不同的光譜圖，且彼此間無類比性，這種光譜稱為表觀光譜。要使同一化合物在不同的儀器上能得到具有相同特性的熒光光譜，則需要對儀器的上述特性進(jìn)行校正。經(jīng)過校正的光譜稱為真正的熒光光譜。
激發(fā)波長和發(fā)射波長是熒光檢測的必要參數(shù)。選擇合適的激發(fā)波長和發(fā)射波長，對檢測的靈敏度和選擇性都很重要，尤其是可以較大程度地提高檢測靈敏度。
熒光屬于光致發(fā)光，需選擇合適的激發(fā)光波長(Ex)以利于檢測。激發(fā)波長可通過熒光化合物的激發(fā)光譜來確定。激發(fā)光譜的具體檢測辦法是通過掃描激發(fā)單色器，使不同波長的入射光激發(fā)熒光化合物，產(chǎn)生的熒光通過固定波長的發(fā)射單色器，由光檢測元件檢測。zui終得到熒光強(qiáng)度對激發(fā)波長的關(guān)系曲線就是激發(fā)光譜。在激發(fā)光譜曲線的zui大波長處，處于激發(fā)態(tài)的分子數(shù)目zui多，即所吸收的光能量也zui多，能產(chǎn)生zui強(qiáng)的熒光。當(dāng)考慮靈敏度時，測定應(yīng)選擇zui大激發(fā)波長。
一般所說的熒光光譜，實(shí)際上僅指熒光發(fā)射光譜。它是在激發(fā)單色器波長固定時，發(fā)射單色器進(jìn)行波長掃描所得的熒光強(qiáng)度隨熒光波長(即發(fā)射波長，Em)變化的曲線。熒光光譜可供鑒別熒光物質(zhì)，并作為熒光測定時選擇合適的測定波長的依據(jù)。
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