2013-08-15
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杭州森尼歐提供液相色譜儀色譜柱的選擇指南
現(xiàn)代液相色譜儀色譜中，分離效果好壞很大程度上取決于色譜填料的選擇。但是色譜填料的選擇范圍很寬，要做合適的選擇，必須對此有一定的認識和了解。
一、硅膠基質填料：
1、正相色譜
正相色譜用的固定相通常為硅膠（Silica）以及其它具有極性官能團,如胺基團（NH2,APS）和氰基團（CN,CPS）的鍵合相填料。
由于硅膠表面的硅羥基（SiOH）或其它極性基團極性較強，因此，分離的次序是依據(jù)樣品中各組份的極性大小，即極性較弱的組份zui先被沖洗出色譜柱。
正相色譜使用的流動相極性相對比固定相低，如：正己烷（Hexane）、氯仿（Chloroform）、二氯甲烷（Methylene Chloride）等。
2、反相色譜
反相色譜用的填料常是以硅膠為基質，表面鍵合有極性相對較弱的官能團的鍵合相。反相色譜所使用的流動相極性較強，通常為水、緩沖液與甲醇、乙腈等的混合物。
樣品流出色譜柱的順序是極性較強的組份zui先被沖洗出，而極性弱的組份會在色譜柱上有更強的保留。
常用的反相填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl）等。
二、聚合物填料
聚合物填料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸酯等，其主要優(yōu)點是在pH值為1～14均可使用。
相對于硅膠基質的C18填料，這類填料具有更強的疏水性；大孔的聚合物填料對蛋白質等樣品的分離非常有效。
現(xiàn)有的聚合物填料的缺點是相對硅膠基質填料，色譜柱柱效較低。
三、其它無機填料
其它HPLC的無機填料色譜柱也已經(jīng)商品化。由于其特殊的性質，一般于特殊的用途。如，石墨化碳正逐漸成為反相色譜柱填料。這種填料的分離不同于硅膠基質烷基鍵合相，石墨化碳的表面即是保留的基礎，不再需其它的表面改性。該柱填料一般比烷基鍵合硅膠或多孔聚合物填料的保留能力更強。石墨化碳可用于分離某些幾何異構體,又由于在HPLC流動相中不會被溶解, 這類柱可在任何pH與溫度下使用。 氧化鋁也可用于HPLC,氧化鋁微粒剛性強，可制成穩(wěn)定的色譜柱柱床，其優(yōu)點是可在pH高達12的流動相中使用。但由于氧化鋁與堿性化合物作用也很強，應用范圍受到一定的限制，所以未能廣泛應用。新型氧化鋯基質色譜填料也可用于HPLC,商品化的僅有聚合物涂層的多孔氧化鋯微球色譜柱，應用pH范圍1～14，溫度可達100℃。由于氧化鋯填料是zui近幾年才開始研究，加之面臨的實驗難度，其重要用途與優(yōu)勢尚在進行中。
當然和氣相色譜的原理一樣，液相色譜的柱長度，柱內徑對分離效果也有重要的影響。
您現(xiàn)在就可以看到其實液相色譜柱的分離效果主要取決于其色譜填料，柱長度，柱內徑這幾個因素，從原理上講，這幾個因素相同的柱子，其分離效果是*一樣的。
考慮到這一點，現(xiàn)在您*根據(jù)這個更加本質的依據(jù)來現(xiàn)在您的液相色譜柱，而不必一定去現(xiàn)在昂貴的標準液相色譜柱。
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